Резюме
Будаш Г.В., Білько Д.І., Саріч Т., Білько Н.М. Застосування циклоспорину для підвищення ефективності диференціювання плюрипотентних клітин в кардіоміоцити.
Основним методом диференціювання ембріональних стовбурових клітин в кардіоміоцити є формування ембріоїдних тілець - агрегатів клітин, які відображають ранні етапи розвитку ембріона. Одним з методів отримання ембріоїдних тілець є культивування суспензійної культури ЕСК на орбітальному шейкері в неадгезивному культуральному пластику. Аналіз отриманих клітин серця проводили спостерігаючи в світловому мікроскопі за розвитком ембріоїдних тілець, що спонтанно скорочувались, а також визначаючи кількість GFP+ клітин методом проточної цитофлюоромитрії, візуалізацію кардіоміоцитів проводили під флюорисцентним мікроскопом. В роботі було доведено, що застосування методів диференціації розроблених для ембріональних стовбурових клітин можна застосовувати для диференціації індукованих плюрипотентних клітин. Застосування циклоспорину 1,5-2 рази покращує вихід кардіоміоцитів.
Ключові слова: ембріональні стовбурові клітини, індуковані плюрипотентні клітини, кардіоміоцити, циклоспорин.

Резюме
Будаш Г.В., Білько Д.И., Сарич Т., Билько Н.М. Применение циклоспорина для повышения эффективности дифференцирования плюрипотентных клеток в кардиомиоциты.

Основным методом дифференцировки эмбриональных стволовых клеток в кардиомиоциты является формирование эмбриоидных телец - агрегатов клеток, которые отражают ранние этапы развития эмбриона. Одним из методов получения эмбриоидных телец является культивирование суспензионной культуры ЭСК на орбитальном шейкере на неадгезивном культуральном пластике. Анализ полученных клеток сердца проводили наблюдая за развитием спонтанно сокращающихся эмбриоидных телец, также определяли количество GFP+ клеток методом проточной цитофлюоромитрии, визуализацию кардиомиоцитов проводили под флюорисцентный микроскопом. В работе было доказано, что применение методов дифференциации разработанных для эмбриональных стволовых клеток можно использовать для дифференциации индуцированных плюрипотентных клеток. Применение циклоспорина в 1,5-2 раза улучшало выход кардиомиоцитов.
Ключевые слова: эмбриональные стволове клетки, индуцированые плюрипотентные клетки, кардиомиоциты, циклоспорин.

Summary
Budash G.V., Bilko D.I., Sarich T., Bilko N.M. Application of cyclosporine for the rise of efficiency of differentiation of pluripotent cells into cardiomyocytes.
The main method for differentiation of embryonic stem cells into cardiomyocytes is formation of embryoid bodies - aggregates of cells that express the early stages of embryo development. One method of obtaining embryoid bodies is the cultivation of embryonic stem cells in suspension culture on orbital shaker at nonadherent culture dish. Analysis of the cardiomyocytes were performed by observing the development of embryonic bodies which were contracting spontaneously under the light microscopy, the number of GFP+ cells was measured by FACS, visualization of cardiomyocytes was performed under fluorescent microscope. It was proved that the use of methods developed for the differentiation of embryonic stem cells can be used for differentiation of induced pluripotent cells. Addition of cyclosporine could improve the yield of cardiomyocytes up to 1.5-2 times.
Key words: embryonic stem cells, induced pluripotent stem cells, cardiomyocytes, cyclosporine.

Рецензент: д.біол.н., проф.С.М.Смірнов

УДК 599.323.4:591.1 

Национальный университет "Киево-Могилянская академия" ​​(Киев)

Національний університет "Києво-Могилянська академія" (Київ)

Centre of Molecular and Cell Research, National University of “Kyiv-Mohyla Academy”

nbilko@ukma.kiev.ua

Інститут Нейрофізіологій Кельнського університету (Кельн, Німеччина)

Література
1. In vitro differentiation of mouse embryonic stem cells into cardiac cells / P. Emoke, S. Lichner, E. Gosca [et al.] // Romanian Biotechnological Letters. - 2011. - Vol.16, № 3. - P.6170-6180.
2. Takahashi K. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors / K. Takahashi// Cell. - 2008. - Vol. 131. - P.861-872.
3. Takahashi K. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryoinic and adult fibroblast cultures by defined factors / K.Takahashi, S.Yamanaka // Stem Cell. - 2006. - Vol. 1. - P. 39-49.
4. Cardiogenic differentiation and transdifferentiation of progenitor cells / H. Reinecke [et al.] // Circ. Res. - 2005. - Vol. 103. - P. 1058-1071.
5. Kurosava H. Methods for inducing embryoid body formation: in vitro differentiation system of embryonic stem cell / H.Kurosawa // Journal of Bioscience and Bioengineering. - 2007. - Vol. 103. - P.389-398.
6. Laflamme M.A. Regenarating the heart / M.A. Laflamme, C.E. Murry // Nat. Biotechn. - 2005. - Vol. 23. - P. 845-856.
7. Fukuda K. Stem cell as a source of regenerative cardiomyocytes / K.Fukuda, S. Yuasa // Cir. Res. - 2006. - Vol. 98. - P. 1002-1013.
8. Cyclosporine A potently induce highly cardiogenic progenitors from embryonic stem cells / P. Yan [et al.]// Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2009. - Vol. 379. - 115-120.
9. Effect of cyclosporine on reperfusion injury in acute myocardial infarction / C. Piot [et al.] // N. Engl. J. Med. - 2008. - Vol. 359. - P. 473-481.